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La recherche sur les vaginites et vaginoses au CHU-MEL révèle une prévalence de 56% de perturbations de la flore vaginale chez les femmes admises entre janvier 2021 et mars 2023, avec Candida albicans identifié comme le germe le plus fréquemment isolé.
MATERIELS ET METHODES
2-3- MATERIELS ET METHODES
2-3-1- Matériels
2-3-1-1- Matériels techniques et consommables
Le matériel technique est composé de : incubateur, bunsen, réfrigérateur, hotte a flux laminaire, table gynécologique, spéculum stérile, torche.
Comme consommables et réactifs, nous avons : eau physiologique stérile de 9g de NaCl/L, mercryl ou savon liquide, cotons stériles, papier pH, solution de potasse, milieu de culture (EMB, Chapman TSA, Sabouraud, GC+polyvitex, gelose au sang frais (GSF+ANC)), écouvillons stériles, lames et lamelles.
2-3-1-2- Matériels de collecte
Les données ont été collectées essentiellement à partir des registres des années 2021, 2022 et 2023 des examens de sécrétions cervico-vaginales. Les variables ont été exprimés en effectifs et pourcentages.
2-3-2- Méthodes
2-3-1-1- Type, lieu et période d’étude
Il s’agit d’une étude rétrospective analytique, portant sur une période de vingt-sept (27) mois, du 03 janvier 2021 au 22 mars 2023. Elle s’est déroulée du 19 Avril au 09 juin 2023 au service de Bactériologie du CHU-MEL.
2-3-1-2- Population d’étude
La population d’étude est constituée de 395 femmes.
2-3-1-3- Phase technique
2-3-2-3-1- Phase pré analytique
Cette section de la phase pré-analytique regroupe toutes les conditions à mettre en œuvre avant la manipulation des différents examens de notre étude. Elle consiste à :
- Ajouter 2ml d’eau physiologique dans les étuis de prélèvement ;
- Allonger la patiente sur le dos de préférence sur la table gynécologique les genoux fléchis en écartant les cuisses.
- Nettoyer la vulve avec un tampon stérile et imbibé du mercryl.
- Mettre en place le speculum verticalement et en position fermée dans le vagin. Lorsqu’il est introduit aux ¾, le retourner délicatement afin de le mettre en position horizontale avant de cramper.
- Disposer de deux écouvillons stériles, un pour l’exocol et le second pour l’endocol.
- Replacer les écouvillons dans leur étui sans toucher l’ouverture à la fin du prélèvement.
- Retirer le spéculum en commençant par le décamper doucement, puis en le retirant tout en effectuant ¼ de tour pour le remettre en position verticale.
2-3-2-3-2- Phase analytique
Première journée
Elle a été consacrée à l’examen macroscopique, l’examen microscopique et la culture.
a- Examen macroscopique
L’examen macroscopique a permis d’apprécier l’aspect, l’odeur, la couleur et le pH des leucorrhées.
b- Examen microscopique Il comprend l’état frais et l’état coloré.
Etat frais
Chacun des écouvillons a été imprimé dans un tube à essai contenant 2ml d’eau physiologique stérile. Une goutte de la suspension obtenue a été déposée sur une lame, puis recouverte d’une lamelle. L’observation a été réalisée au microscope à l’objectif x40. L’examen à l’état frais a permis d’apprécier les éléments figurés notamment les leucocytes et de rechercher la présence de parasites éventuels.
Etat coloré au Gram
A partir de la suspension précédente, un frottis a été réalisé et coloré par la méthode de GRAM (Annexe 1). L’observation a été faite au microscope à l’objectif à immersion. L’état coloré a permis d’apprécier la flore vaginale par l’utilisation du Score de Nugent (Annexe 2).
c- Culture
Les milieux de culture ensemencés ont été choisis en tenant compte des résultats obtenus à l’examen microscopique après coloration de Gram. Ces milieux de culture (Annexe 3) ont été incubés à 37°C pendant 24 heures.
Deuxième journée
Elle a été consacrée à la lecture des milieux ensemencés, à l’examen de contrôle et à l’identification.
a- Examen de contrôle
Après lecture des milieux de culture ensemencés, un Gram de contrôle a été réalisé sur les colonies.
b- Identification
L’identification des bactéries a été faite en utilisant la galerie rapide. La galerie est composée de :
- Gélose Kligler-Hajna ;
- Milieu Urée-Indole ;
- Gélose au citrate de Simmons ;
- Gélose Mannitol-Mobilité et
- Eau peptonnée exempte d’indole.
La galerie est incubée pendant 24h à 37°C.
Troisième journée
Après lecture de la galerie, une série de tests biochimiques notamment la recherche de la catalase, la recherche de la staphylocoagulase libre, la recherche de l’oxydase et l’antibiogramme ont été réalisés.
a- Recherche de la catalase
Technique
- Déposer une goutte d’eau oxygénée sur une lame à l’aide d’une pipette pasteur stérile.
- Prélever avec une anse de platine une colonie du germe et l’émulsionner dans la goutte d’eau oxygénée.
Le résultat positif se traduit par une effervescence.
b- Recherche de la staphylocoagulase libre
Technique
- 0,25mL de plasma de lapin reconstitué dans un tube à hémolyse.
- Ajouter 0,25mL d’une suspension bactérienne de 24h.
- Homogénéiser le mélange.
- Incuber le tube à l’étuve à 37°C.
La réaction positive se traduite par l’apparition d’un coagulum.
c- Recherche de l’oxydase
Technique
- Déposer deux gouttes du réactif d’oxydase sur du papier buvard placé sur une lame stérile.
- Prélever une colonie et l’étaler sur le papier buvard avec une pipette pasteur stérile.
L’apparition d’une coloration violacée signe la présence d’une oxydase.
d- Réalisation de l’antibiogramme
Des disques de papier buvard imprégnés des différents antibiotiques à tester ont été déposés à la surface d’une plaque de gélose, préalablement ensemencée avec le germe à étudier. Ceci permet de rechercher le profil de résistance des souches vis-à-vis des antibiotiques.
Technique
La méthode de l’antibiogramme par écouvillonnage est la technique utilisée pour notre étude.
Préparation de la suspension bactérienne
- Prélever 3 à 5 colonies de l’espèce bactérienne en culture pure et l’ensemencer dans 5mL d’eau physiologique.
- Incuber pendant quelques minutes à 37°C.
Ensemencement de la boîte
- Étaler en stries à l’aide d’un écouvillon stérile la suspension bactérienne sur la surface de la gélose Muller Hinton.
- Laisser sécher 5 minutes, puis poser les disques.
Pose des disques et incubation
- Déposer les disques d’antibiogramme à plat sans glissement en les appuyant légèrement sur la surface de la gélose. Une distance minimale de 15 mm doit séparer un disque périphérique du bord de la boîte et deux disques doivent être éloignés au minimum de 30 mm de sorte que les zones d’inhibition ne se chevauchent.
- Laisser les disques s’imprégner pendant 15 minutes.
- Incuber à 37°C à l’étuve pendant 24 heures.
- Mesurer les zones d’inhibition à l’aide d’une règle graduée et les comparer à l’abaque.
Le diamètre de la zone d’inhibition nous permet de dire s’il y a résistance ou sensibilité.
Phase post analytique (quatrième journée)
L’antibiogramme a été lu. Les résultats ont été mis au propres et reportés dans le cahier de paillasse. Les directives standards pour le nettoyage, le rangement du matériel, de gestion des réactifs chimiques et des échantillons ont été observées dans toutes les procédures.
2-3-2-1- Traitement et analyses statistiques
Les données collectées (cliniques et biologiques) à partir des registres de PV et des résultats de paillasse. Les données ont été traitées grâce aux logiciels Excel et STATA V11.0. Le seuil de significativité est fixé à p ˂ 0,05.